本课题通过款冬花花蕾、开放花液相图谱的比较为款冬花未开放花苞入药提供一个有效依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料：

　　野生款冬花(蔚县)，芦丁对照品、槲皮素对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯，甲醇、冰醋酸等试剂均为分析纯，双蒸水(自制)。

　　1.2 实验仪器：

　　日本岛津2010A 高效液相色谱仪，Sartorius 分析天平。Spe- ed SFE 超临界流体萃取仪(美国Applied2Separations公司)。

　　2 方法与结果

　　2.1 溶液配制

　　2.1.1 对照品溶液的配制：分别精密称取芦丁、槲皮素对照品适量，加70%甲醇溶解，制成浓度分别为0.2312mg/mL、0.1872mg/mL 的对照品贮备液，备用。精密吸取芦丁对照品贮备液2mL、槲皮素对照品贮备液2mL，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，制得混合对照品溶液。

　　2.1.2 供试液的配制：款冬花60℃减压真空干燥4h，粉碎过40目筛得款冬花粉末备用。准确称取款冬花粉末20g，40mL 甲醇浸泡1h，CO2超临界流体萃取(温度65℃，压力36Mpa)静态萃取1h 后，动态萃取0.5h，从出口阀接物料，通过真空减压干燥去除夹带剂，获得萃取物2.7g，精密称取款冬花提取物0.02g，加70%的甲醇溶液定容至10mL，取1mL 溶液0.22μm 微孔滤膜过滤备用。

　　2.2 样品分析方法的建立

　　2.2.1 色谱条件：色谱柱：Krosmosil C18柱(4.6mm×200mm， 5μm);流动相：A(乙腈)∶B(0.1% 磷酸水)(80∶20);流速：1.0mL/min;流程：30min;检测波长，254nm、柱温：30;进样量：20μL。色谱图见图1。

　　2.2.2 标准曲线的绘制：精密吸取”2.1.1″项下的芦丁、款冬酮对照品溶液，分别稀释0、2、4、6、8、16 倍，取20μL 注入高效液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

　　2.2.3 精密度试验：精密吸取同一供试品溶液连续进样5 次，记录色谱峰面积，结果芦丁、槲皮素峰面积的RSD 值分别为0.4%、0.6%。结果表明，仪器精密度较好。

　　2.2.4 稳定性试验：精密吸取同一供试品液连续进样5 次，记录色谱峰面积，结果芦丁、槲皮素峰面积的RSD 值分别为0.7%、0.6%。结果表明，溶液基本稳定。

　　2.2.5 重现性试验：重复性试验取款冬酮5 份，每份约20g，按”2.1.2″项方法制备，并进样分析，记录色谱峰面积，结果芦丁、槲皮素峰面积的RSD 值分别为2.2%、2.7%。结果表明，本方法重复性较好。

　　2.2.6 加样回收率试验：采用加样回收法。分别称取已知含量的供试品5 份，每份0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入芦丁、槲皮素对照品贮备液1mL、0.8mL 于具塞锥形瓶中，按”2.1.2 “项下方法制备供试品溶液并进样分析，结果芦丁平均回收率为100.2%，RSD 为1.8%，槲皮素平均回收率为100.6%，RSD 为2.4%。

　　2.3 样品测定：

　　取5 批槲皮素样品，按”2.1.2″项下方法处理，分别测定芦丁与槲皮素含量。

　　3 讨论

　　本实验同时检测了款冬花中芦丁和槲皮素的含量。本文选择CO2 超临界流体萃取法主要是因为该方法对芦丁与槲皮素的提取效率高，同时比较环保，符合绿色化学的要求。通过实验，我们发现河北蔚县款冬花花蕾芦丁与槲皮素的含量在0.31%、0.12%左右，已开放的款冬花芦丁与槲皮素的含量在0.18%、0.12%左右，为款冬花未开放花苞入药提供一个有效依据。