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原发性痛经( primary dysmenorrhea，PD) 是指经期或经行前后妇女出现小腹疼痛或痛引腰骶，乃至剧烈疼痛发生晕厥而其生殖器官无明显器质性改变的一种疾病。近年来研究认为原发性痛经的主要机制与前列腺素( prostaglandin，PG)有关，因此使用非甾体类抗炎药可以减少PG 的合成而缓解子宫痉挛性收缩，从而起到缓解疼痛的作用，但是起到的作用是短暂性的，远期疗效仍不够理想，且具有一定的副作用。本课题从督脉入手，研究隔药灸命门穴对治疗原发性痛经的作用机理。
1 材料与方法
1. 1 动物及分组选用清洁级健康雌性2 ～ 3 月龄未孕SD 大鼠100 只，体重( 200 ± 10) g，购于广西医科大学实验动物中心，许可证编号: SCXK( 桂) 2009-0002，将100只大鼠按SPSS 17. 0 统计软件产生的随机数字分为造模组( 80 只) 、正常对照组( 20 只) 。造模成功后，再用SPSS 17. 0 统计软件产生的随机数字，并将造模组按随机数字分为模型组、药物组、针刺组、隔药灸组各20 只。实验过程中对动物的处理均遵照2006 年科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1. 2 主要试剂与用具①药饼: 方用理中汤加减: 白术、党参、干姜、五灵脂、肉桂各3 份，肉豆蔻、吴茱萸各1 份，将药物打碎成粉，用黄酒和药粉调和，统一做成厚约0. 2 cm、直径0. 8 cm 的药饼。用针在药饼中间刺10 个孔备用。②艾柱: 统一制作小号艾柱( 每壮0. 5 g，用药物电子天平统一称重，高0. 5 cm、底直径0. 5 cm) 。③采用华佗牌0. 25 mm × 25 mm 的一次性无菌针灸针。④主要实验试剂: 缩宫素( 河南辅仁怀庆堂制药有限公司，批号Z42021348) ，苯甲酸雌二醇( 杭州动物药品，批号120429) ; 检测前列腺素F2α受体抗体( PGF2α-R) 和前列腺素E2受体抗体( PGE2-R) 的免疫组化试剂盒( 北京中杉金桥生物技术有限公司，批号: SP-9000-D)
1. 3 模型的制作以及干预方法
1. 3. 1 空白对照组正常空白对照组予股部连续10 d 皮下注射生理盐水: 第1、10 天0. 5 mg /只，第2～ 9 天0. 2 mg /只。之后继续将生理盐水皮下注射于股部，每日1 次，连续7 d，只予固定，不予治疗。
1. 3. 2 模型组适应性饲养1 周后参照文献[3]采用缩宫素造模方法制备大鼠原发性痛经模型。大鼠股部连续10 d 苯甲酸雌二醇皮下注射: 第1、10天0. 5 mg /只，第2 ～ 9 天0. 2 mg /只。于末次皮下注射苯甲酸雌二醇24 h 后，大鼠腹腔注射缩宫素2U/只造模成功。之后继续将苯甲酸雌二醇皮下注射于股部0. 2 mg /只，每日1 次，连续7 d，只予固定，不予治疗。
1. 3. 3 药物组注射缩宫素及苯甲酸雌二醇同模型组。注射苯甲酸雌二醇于股部皮下的第11 天开始，每天用加味益母草膏( 80 g /kg) 灌胃给药，每日1 次，连续7 d。
1. 3. 4 针刺组注射缩宫素及苯甲酸雌二醇同模型组。注射苯甲酸雌二醇于股部皮下的第11 天开始，采取针刺疗法。用自制的布袋固定大鼠，使其保持俯卧位。针刺命门穴( 根据华兴邦等著《大鼠穴位图谱的研制》中，命门穴位于第二腰椎棘突下)， 直刺4 mm，平补平泻，每次留针30 min，每隔5 min，捻转30 s，将苯甲酸雌二醇皮下注射于股部的第11天开始，每日1 次，连续7 d。
1. 3. 5 隔药灸组注射缩宫素及苯甲酸雌二醇同模型组。注射苯甲酸雌二醇于股部皮下的第11 天开始，采用隔药灸疗法。采用自制布袋固定大鼠，使实验大鼠保持俯卧位。将理中汤加减的药粉制成药饼置于命门穴上，其上置小艾柱点燃施灸，当艾柱燃尽后，易炷再灸。每穴均六壮。以灸至局部皮肤潮红不起泡为度，若灼热，可适当用镊子上下移动药饼。每日1 次，连续7 d。
1. 4 扭体反应观察在末次干预后30 min 内，观察各组大鼠扭体反应情况，统计大鼠扭体潜伏期和扭体次数。扭体反应标准: 大鼠躯干与后肢伸展，腹部收缩内凹，臀部与一侧肢体内旋。
1. 5 子宫内膜PGF2α-R 和PGE2-R 的测定末次干预1 h 后，各组动物在6%水合氯醛麻醉下( 300 mg /kg，腹腔注射) ，解剖大鼠，取子宫内膜组织，石蜡包埋，每块组织连续切取3 μm 的组织切片，然后进行脱蜡、水化，抗原修复，阻断内源性过氧化物酶，滴加适量一抗，37 ℃孵育，滴加适量辣根酶标羊抗小鼠/兔IgG 聚合物，DAB 显色，复染，脱水、透明、封片，读片，拍片。PBS 代替一抗作为阴性对照。用Image-Pro Plus 分析拍摄图片中蛋白表达的平均光密度值。
1. 6 统计方法数据用均值± 标准差表示。采用SPSS17. 0 统计软件处理数据，多组间进行单因素方差分析( One-Way ANOVA) ，组间两两比较采用LSD 检验。以P < 0. 05 为差异有统计学意义的标准。
2 结果
2. 1 各组大鼠扭体反应比较模型组有较多扭体次数，且有扭体潜伏期，而空白组无扭体，2 组相比有统计学意义( P <0. 01) ，说明造模成功。与模型组相比，针刺组、药物组、隔药灸组的30 min 内扭体反应次数均减少，且首次扭体潜伏期均明显延长( P < 0. 01) 。针刺组、药物组和隔药灸组扭体的潜伏期相比，差异无统计学意义( P > 0. 05) ; 但与药物组相比，针刺组及隔药灸组均能明显减少30 min 内扭体反应次数( P < 0. 01) ; 且针刺组与隔药灸组比较，隔药灸组30 min 内扭体次数最少( P < 0. 01) 。见表1。直刺4 mm，平补平泻，每次留针30 min，每隔5 min，捻转30 s，将苯甲酸雌二醇皮下注射于股部的第11天开始，每日1 次，连续7 d。1. 3. 5 隔药灸组注射缩宫素及苯甲酸雌二醇同模型组。注射苯甲酸雌二醇于股部皮下的第11 天开始，采用隔药灸疗法。采用自制布袋固定大鼠，使实验大鼠保持俯卧位。将理中汤加减的药粉制成药饼置于命门穴上，其上置小艾柱点燃施灸，当艾柱燃尽后，易炷再灸。每穴均六壮。以灸至局部皮肤潮红不起泡为度，若灼热，可适当用镊子上下移动药饼。每日1 次，连续7 d。
2. 2 各组大鼠子宫内膜PGF2α-R 和PGE2-R 表达比较与空白组比较，模型组、药物组、针刺组及隔药灸组PGF2α-R 表达明显增多，PGE2-R 表达明显减少( P < 0. 01) ; 与模型组比较，药物组、针刺组及隔药灸组PGF2α-R 表达明显减少，PGE2-R 表达明显增多( P < 0. 01 ) ; 与药物组比较，针刺组及隔药灸组PGF2α-R 明显减少，PGE2-R 表达明显增多( P <0. 01) ; 与针刺组比较，隔药灸组PGF2α-R 表达减少明显( P < 0. 05) ，但PGE2-R 表达明显增多( P <0. 01) 。见表2。
3 讨论
《灵枢·五音五味》曰: “今妇人之生，有余于气，不足于血，以其数脱血也。”《金匮要略·妇人杂病脉证并治》亦提到: “带下，经水不利，少腹满痛。”中医学认为痛经部位在子宫、冲任，以寒凝胞宫、瘀阻冲任、气血运行不畅而致的”不通则痛”以及气血不足引发的”不荣则痛”为主要病机。西医学认为，月经周期中激素变化与痛经的发生存在一定的关系，而与PG 的变化密切相关[4 – 6]。子宫内膜在非妊娠情况下合成的PG 主要为PGF2α和PGE2。有研究表明[7]，PGF2α可促使子宫收缩，使子宫张力增加，痛经越严重，其妇女体内的PGF2α越高，相反，PGE2可抑制子宫收缩，使子宫松弛。本实验结果显示，通过针刺、益母草膏以及隔药灸命门治疗，均可使痛经模型大鼠子宫内膜PGF2α含量减少，PGE2含量增加，从而改善痛经模型大鼠的疼痛，而隔药灸命门的疗效优于针刺组和药物组。灸法具有良好的温通作用，《本草从新》记载:”艾叶苦辛，能……走三阴，理气血，逐寒湿，暖胞宫，调经安胎，以之灸火，能透诸经而除百病。”而且有相关研究指出艾灸不仅可以促进盆腔气血的运行，增强局部组织的灌流量，而且可以降低神经兴奋提高其痛阈[8]，抑制子宫收缩，解除子宫痉挛疼痛。命门穴与女子胞宫亦密切相关，《难经·三十九难》中记载: “命门者，诸精神之所舍也，男子以藏精，女子以系胞，其气与肾通。”故灸命门穴可以很好地纠正女子原发性痛经的”不通则痛”和”不荣则痛”的病理。
理中汤出自张仲景之《伤寒论》，亦有较强的温通作用，其做成药饼后做隔药灸，既可发挥灸法的作用，而且还将药物的力量输送到人体，更好地发挥温经散寒、化瘀止痛的作用，从而减少疼痛，有相关学者[9]证实这与其燃烧时产生的近红外线具有很强的穿透力有关。总之，隔药灸治疗原发性痛经能调节PGF2α-R及PGE2-R 表达，使两者重新恢复平衡协调从而达到治疗效果，也证明了隔药灸治疗原发性痛经具有良好的疗效。